金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基的原理及操作步驟介紹
金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基是用于金黃色葡萄球菌的分離和初步鑒別。可替代傳統(tǒng)的高鹽甘露醇及血平板培養(yǎng)基,具有較高的特異性、靈敏度,可消除假陰性及假陽(yáng)性;肉眼觀察菌落顏色即可用于金葡菌的初步鑒定,在此培養(yǎng)基中添加妥布霉素或甲氧西林等抗生素,可篩選耐甲氧西林金葡菌(MRSA);培養(yǎng)基的配置簡(jiǎn)單,煮沸即可,無(wú)須高壓滅菌;操作簡(jiǎn)便,劃線接種,37?C培養(yǎng),24小時(shí)出結(jié)果;是臨床檢測(cè)、食品工業(yè)、化妝品工業(yè)的好幫手。
檢驗(yàn)原理:
蛋白胨、大豆胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化鈉維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑;顯色劑與金黃色葡萄球菌具有的酶發(fā)生特異性反應(yīng),水解底物,釋放出顯色基團(tuán),在無(wú)色透明平板上,金黃色葡萄球菌產(chǎn)生粉紅-紫紅的邊緣整齊菌落;抑菌劑可抑制雜菌的生長(zhǎng)。
用法:
稱取金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基17.26g加入200ml蒸餾水,加熱*溶解,煮沸2-3min,冷至50℃左右時(shí),傾入無(wú)菌平皿,備用。
操作步驟:
涂布法:
1、按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、SN標(biāo)準(zhǔn)、ISO標(biāo)準(zhǔn)或其它方法制備樣品液;
2、取1ml適宜稀釋度的樣品液加入表面干燥的金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基平板中心,每個(gè)稀釋度做2個(gè)平板;
3、以L形玻璃棒將樣品液涂布于瓊脂表面,避免涂到平板邊緣,將平板正置直至樣品液被培養(yǎng)基吸收;
4、平板倒置放入培養(yǎng)箱36℃培養(yǎng)18-24h,典型的金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基為凸起的藍(lán)綠色菌落;
5、計(jì)數(shù)平板上所有凸起的藍(lán)綠色菌落。
劃線法:
1、按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、SN標(biāo)準(zhǔn)、ISO標(biāo)準(zhǔn)或其它方法制備樣品液;
2、取10ul-20ul樣品液劃線接種于已凝固好的金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基平板上;
3、倒置放入培養(yǎng)箱36℃培養(yǎng)18-24h,典型的葡萄球菌顯色培養(yǎng)基為凸起的藍(lán)綠色菌落;
注意:金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基鏡檢為革蘭氏陽(yáng)性球菌,且兔血漿凝固酶試驗(yàn)為陽(yáng)性。