革蘭陽性菌鑒定卡不僅能觀察到細菌的形態(tài)而且還可將所有細菌區(qū)分為兩大類：染色反應呈藍紫色的稱為革蘭氏陽性細菌，用G+表示；染色反應呈紅色（復染顏色）的稱為革蘭氏陰性細菌，用G--表示。細菌對于革蘭氏染色的不同反應，是由于它們細胞壁的成分和結構不同而造成的。革蘭氏陽性細菌的細胞壁主要是由肽聚糖形成的網(wǎng)狀結構組成的，在染色過程中，當用乙醇處理時，由于脫水而引起網(wǎng)狀結構中的孔徑變小，通透性降低，使結晶紫-碘復合物被保留在細胞內而不易脫色，因此，呈現(xiàn)藍紫色；革蘭氏陰性細菌的細胞壁中肽聚糖含量低，而脂類物質含量高，當用乙醇處理時，脂類物質溶解，細胞壁的通透性增加，使結晶紫-碘復合物易被乙醇抽出而脫色，然后又被染上了復染液（番紅）的顏色，因此呈現(xiàn)紅色。

　　革蘭陽性菌鑒定卡使用注意事項：

　　（1）KOH溶液與菌落比例應適當，如菌懸液太?。泳涮伲┛沙霈F(xiàn)假陰性。4%KOH溶液應新鮮配制（即用前當日配制），否則也易出現(xiàn)假陰性。

　?。?）革蘭陽性菌培養(yǎng)物如超過48小時，可能隨著菌齡增加而失去革蘭陽性菌的特性，而使本試驗從陰性變成陽性，即出現(xiàn)假陽性。因此必須使用新鮮培養(yǎng)物。

　　注：如果有些菌革蘭氏染色區(qū)分不明顯，建議兩種方法結合使用，保證結果的準確性。

　　制備菌液：加1-2滴自來水于小試管中，用接種環(huán)從斜面上挑取2-3環(huán)的菌苔于試管中并充分打均，制成濃稠的菌液。

　　加染色液：加5%孔雀綠水溶液2-3滴于小試管中，用接種攪拌使染料與菌液充分混合。

　　加熱：將此試管浸于沸水浴（燒杯）中，加熱15-20min。

　　涂片：用接種環(huán)從試管底部挑數(shù)環(huán)菌液于潔凈的玻片上，并涂成薄膜。

　　固定：將涂片通過微火3次。

　　脫色：用水洗，直至流出的水中無孔雀綠顏色為止。

　　復染：加沙黃水溶液，染2-3min后，頃去染色液，不用水洗，直接用吸水紙吸干。

　　鏡檢：用油鏡觀察。