李斯特菌顯色培養(yǎng)基的操作步驟,學(xué)會(huì)沒?
李斯特菌顯色培養(yǎng)基是根據(jù)李斯特菌的β-葡萄糖苷酶活性、鼠李糖發(fā)酵特性和磷脂酰肌醇特異性磷脂酶C(PIPLC)活性進(jìn)行的特異顯色。有β-葡萄糖苷酶活性則菌落為藍(lán)綠色,有鼠李糖發(fā)酵特性則菌落背景為黃色,有PIPLC活性則菌落周圍有不透明光暈。
李斯特菌是革蘭氏陽性的短桿菌,能游動(dòng),可寄生在細(xì)胞內(nèi)。它包括七個(gè)菌種,其中單核細(xì)胞增生李斯特菌是常見的感染人的腸道病原菌,在我國是奶制品等食品的常規(guī)檢查項(xiàng)目。事實(shí)上,在肉制品中也常常發(fā)現(xiàn)有一定李斯特菌的污染。雖然它的致病性并不太高,但對(duì)于嬰幼兒以及免疫缺陷的高危人群,它常帶來嚴(yán)重的食品中毒事件。因此,常規(guī)檢查是否存在李斯特菌污染非常重要。李斯特菌在形態(tài)上容易和鏈球菌、棒狀桿菌相混淆。那么,如何把它鑒別出來呢?推薦使用李斯特菌顯色培養(yǎng)基進(jìn)行鑒別。
用法:
稱取基礎(chǔ)培養(yǎng)基 14.2g 加入 180ml 蒸餾水,加熱溶解并不停攪拌;另取 1.2g 李斯特氏菌添加劑,加入 20ml 無菌水,并加入一些玻璃球,不停振動(dòng) 1-2min,使其混合均勻,將二者分別于 121℃ 高壓滅菌 15 min。冷至 50℃ 左右時(shí),把李斯特氏菌添加劑加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,并加入復(fù)溶后的李斯特氏菌抑菌劑1 支,混勻,傾入無菌平皿。使培養(yǎng)基的厚度約為 2-3mm,這樣有利觀察不透明環(huán)。
操作步驟:
使用前,把制備好的培養(yǎng)基放置室溫 10-20 分鐘。
1、按SN標(biāo)準(zhǔn)、GB標(biāo)準(zhǔn)、FDA標(biāo)準(zhǔn)、ISO標(biāo)準(zhǔn)或其它標(biāo)準(zhǔn)制備樣品液;
2、把樣品液加入李氏增菌肉湯(LB1、LB2)中增菌;或把樣品液和增菌液按照 1:10 的比例混勻,30℃ 培養(yǎng) 24 小時(shí);或其它增菌液中增菌培養(yǎng);
3、取一環(huán)增菌液劃線接種到李斯特菌顯色培養(yǎng)基上,36℃±1℃ 培養(yǎng) 24-48 小時(shí)。